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产品说明/Specification Sheet
产品名称: | 酵母转化试剂盒 | ||||
产品编号: | SK2400-200T | 规格: | 200T | 价格: | ¥698 |
产品类别: | 酵母杂交系类 | CAS#: | N/A | ||
品牌: | coolaber | 级别: | 生物技术 | ||
分子式: | N/A | 分子量: | N/A | ||
危险品: | 危险品系数: | ||||
储存条件: | 2-8℃ | 说明书: | /usr/2160/File/F/F1565.pdf |
产品属性:
酵母感受态细胞的制备: 1.活化菌种。-80℃保存的菌种在固体YPDA培养基(YPDA加20g Agar/L)上划线,在30℃培养2-4天。 2.挑取酵母单菌落在固体YPDA培养基上划3-5 mm的短线,在30 ℃培养2-4天。待酵母单菌落长至2 mm长时,接种。 3.首先把酵母细胞接种到3 ml液体YPDA培养基中,30℃过夜培养。 4.第二天转接到含有30 ml液体YPDA培养基的三角瓶中继续培养,待OD600到0.4-0.5范围内。收集细胞,1000 g,离心5 min, 去上清。 5.沉淀用30-50 ml的无菌的去离子水悬浮。1000 g,离心5 min,去上清。 6.沉淀用合适体积的100 mM LiAc悬浮(30 ml的酵母菌最多用不超过1 ml的100 mM LiAc悬浮,通常100 μl的酵母细胞用于转化一个质粒,即一个反应)。 7.把酵母细胞的悬浮液分装到1.5 ml的离心管中,每管分装100 μl,用于转化一个质粒即一个反应。1000 g,离心5 min,去上清。制备好的感受态细胞备用。 酵母转化: 1.配制预混液,每转化一个质粒即一个反应需要360 μl的预混液。
2.吸取360 μl的预混液加入到感受态细胞中,用枪头反复吹吸沉淀,使离心管底的酵母细胞彻底地悬浮在含有PEG的预混液中。 3.放置在30 ℃的水浴锅中孵育30 min,每10 min混匀一次。 4.放置在42 ℃的水浴锅中热击30 min,每10 min混匀一次。 5.12000 rpm,离心1 min,去掉上清液。 6.沉淀中加入100 μl的无菌的去离子水,悬浮沉淀。 7.把酵母细胞涂到相应的酵母培养基平板上,30℃培养2-4天。 注意事项: 1. 初次使用Carrier DNA,请把装有Carrier DNA的管子在沸水中煮沸5 min,然后立即放在冰上,用后放在-20℃储存备用。下次使用时请在冰上解冻Carrier DNA。 2. PEG溶液在低温环境下会析出,请于常温环境下完全溶解后使用。 3. 转化全程要无菌操作。 |
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